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您的单抗亚型为什么都是 IgM?

 

做单抗的朋友都不喜欢筛到分泌 IgM 亚型的细胞株,主要原因是 IgM 不溶于水,形成五聚体,纯化困难,实验者都对其避之不及;但是过五关斩六将筛选出来的抗体如果都是 IgM 亚型的,这个时候往往是「弃之可惜,食之扎胃」。

单抗筛选到 IgM 亚型,跟免疫的抗原性质、免疫佐剂、免疫程序和融合的试剂,甚至与动物本身都有很大的关系;以上的这些因素大部分是偶然性的因素,只对某些项目,或某个因素的偶然性有关系,一般来说排除的难度很大。做单抗行业的有一句话:「你筛选什么就得到什么?」,本文主要介绍如何让在筛选阶段就完美避开 IgM。

单抗的筛选,特别是融合之后的初次筛选,我们应用的筛选方法基本上都是间接 ELISA 方法,基本流程如下:包被抗原-细胞上清-羊抗小鼠二抗-TMB 底物显色。这个过程的基本原理是,细胞上清中的抗体与抗原结合,羊抗小鼠二抗再与抗体结合;其中的羊抗小鼠二抗是针对所有亚型的小鼠抗体的,当然包括针对 IgM 亚型的。顺着这个逻辑走下去,我们如果把二抗中针对 IgM 亚型的抗体去除,那么我们在筛选中就筛不到针对 IgM 亚型了。为了解决这个问题我们新推出的一款二抗:Frdbio○RHRP 标记羊抗小鼠 IgGs△IgM(Cat. No.SAB9010△6),使用这个二抗进行单抗筛选得到的细胞株就不会有 IgM,只不过成本略微偏高;当然,如果我们指定要筛选某个亚型单抗可不可以?可以,我们就使用 HRP 标记羊抗小鼠独特亚型(IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3)二抗,这些二抗也是单抗抗体亚型鉴定需要用到的。

是不是有了这些二抗利器,我们的单抗筛选就是无往而不利了?显然不是,Frdbio 研发部门总结大量的案例发现,针对某些抗原的单抗无论你怎么筛选,好的抗体偏偏就是 IgM,如果非要强行用 HRP 标记羊抗小鼠 IgGs△IgM 筛选,可能什么也得不到,最后只能不甘心地选择 IgM。

如果我们的单抗亚型只能筛到 IgM,怎么办?请注意关注我们之后技术专题