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Frdbio ®细胞凋亡检测试剂盒
  • 品牌:Frdbio
  • 产地:中国
  • 型号:20T
  • 货号:FrdE00017-1
  • 发布日期: 2023-04-03
  • 更新日期: 2024-01-25
产品详请
产地 中国
品牌 Frdbio
货号 FrdE00017-1
用途范围 科研使用
规格 20T
是否进口

Frdbio ®细胞凋亡检测试剂盒

货号

名称

规格

FrdE00017-1

Frdbio ®细胞凋亡检测试剂盒

20T


.产品说明

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故

可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素(EGFPFITC)标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

.产品保存方法

各组分应在2-8℃条件下避光保存,有效期2年。

.使用方法

1. 悬浮细胞离心(2000rpm 离心5min)收集;贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);

2. 用PBS 洗涤细胞二次(2000rpm 离心5min)收集1-5×105 细胞;

3. 加入500μL Binding BufferFrdE00017-2)悬浮细胞;

4. 加入5μL Annexin V-FITCFrdE00017-1) 混匀后,室温避光,反应15-30min;

5. 用PBS 洗涤细胞一次(2000rpm 离心5min),500μL PBS 重悬细胞;

6. 室温,避光,孵育5min,上机检测。

7. 注:请在1 hour 内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

a. 荧光显微镜观察

1) 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;

2) 对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;

1 将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;

2 用PBS 洗涤细胞两次;

3 在500μL Binding Buffer 中加入5μL Annexin V-FITC 混匀;

4 将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;

5 避光、室温反应5 min

3) 将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下滤光片(FITC)观察,Annexin V-FITC 荧光信号呈绿色。

b. 流式细胞仪分析

1) 用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=525nmAnnexin V-FITC 的绿色荧光通过

FITC 通道(FL1)检测。

.注意事项

1. 微量试剂取用前请离心集液。

2. Annexin V-FITC 避光保存及使用。

3. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。

4. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA PBS 中,防止进一步的损伤。

5. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。

6. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。

*本试剂仅供实验室研究使用