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单克隆抗体制备——融合细胞的培养与筛选

单克隆抗体制备——融合细胞的培养与筛选

 

1. 杂交瘤融合细胞铺板培养

1.1 96孔板液体培养

1.1.1用排枪将重悬后的细胞均匀铺入96细胞培养板,200μl/孔(若饲养细胞已提前铺好,则只需每孔加100μl即可);

1.1.2铺好后置5% CO2,37℃培养箱培养,培养7天后,用HAT完全培养基换液一半。

1.2半固体培养基培养

1.2.1 取2%甲基纤维半固体培养基(1×1640不完全培养基+1×HAT+1%双抗+20%胎牛血清)20ml,加入20ml融合细胞和饲养细胞悬液(HAT完全培养基),再加入2ml促进杂交瘤形成添加物因子,充分混匀后,倒入6孔板,3ml/孔;

1.2.2 6孔板置5% CO2,37℃培养箱培养,长出白色集落,挑取白色集落至含饲养细胞的96孔板中。

货号

产品名称

规格

产品描述

MCC0019

杂交瘤半固体培养(2%甲基纤维素)

10ml/50ml/100ml

细胞融合半固体培养或者亚克隆。

2. 杂交瘤阳性细胞孔的筛选

阳性细胞孔的筛选一般采用间接ELISA法。

2.1 抗原最佳包被浓度的确定

参照“多克隆抗体制备——抗体效价的检测(ELISA)

(在进行杂交瘤细胞检测之前必须用阳性免疫血清建立好ELISA检测方法。)

2.2 杂交瘤细胞孔的检测

按照最佳包被浓度包被ELISA板,封板后,取杂交瘤细胞细胞培养上清,加入酶标板孔,每孔100μl;孵育洗涤后,分别加入HRP标记羊抗小鼠,底物显色,读取OD值。

2.3 阳性细胞株/阳性孔的选取

选取阳性值最高的孔予以保留并进行亚克隆。

(具体该选择保留多少孔根据项目实际需求决定。)



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