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单克隆抗体制备——细胞株的冻存与复苏

单克隆抗体制备——细胞株的冻存与复苏

 

1. 细胞株的冻存:杂交瘤细胞冻存是单抗中重要环节。

1.1 将处于对数生长期的杂交瘤细胞重悬起来,1,500rpm离心5min,去除上清。

1.2 加入适量的细胞冻存液(10% DMSO,20%~50%胎牛血清,1640培养基),轻轻吹打重悬细胞,使终浓度达到0.5~1×107个/ml。

1.3 将细胞分装入细胞专用冻存管,每管1.0~1.5ml,在管子上标准细胞名称、冻存日期和冻存人。

1.4 冻存降温程序:-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。

(如果实验室的实验条件受限,可以采取以下的操作流程:-20℃冰箱2h ,-70℃冰箱过夜,然后移入液氮中;还可以直接将细胞冻存管裹上厚厚的棉套,直接放入-80℃冰箱过夜,次日转入液氮保存。

1.5 细胞冻存中常用冻存液为DMSO,DMSO的纯度对冻存细胞至关重要,建议使用细胞冻存专用级别的。

1.6 细胞融合孔检测到阳性,如果来不及亚克隆往往只能忍痛看着细胞株丢失,福因德生物为了解决此类问题专门研发96孔板整板细胞冻存液,冻存液使用方便,加入冻存板直接放入-80℃冰箱即可。)

货号

产品名称

规格

产品描述

MCC0078

细胞冻存液

5×10ml

即用型细胞冻存液,细胞存活率高。

MCC0079

细胞冻存专用DMSO

5×1ml

无菌低毒,经细胞冻存测试。

MCC0080

2×细胞板细胞冻存液

5×10ml

适合整板冻存杂交瘤细胞。

2. 单克隆细胞株细胞复苏

2.1 从液氮容器中取出细胞冻存管,迅速浸入37℃温水中不断摇动令其尽快融化。

2.2 待其完全融化,取出冻存管,打开盖子,吸取细胞悬液转移到离心管,并滴加10倍以上不完全培养基,混匀。

2.3 离心, 1,500rpm,5min。

2.4 弃上清液,加入含10%胎牛血清完全培养基重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种到培养瓶中,37℃培养箱静置培养。

2.5 次日更换一次培养液,继续培养。

(将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。冻存和复苏最好用新配制的培养液。)


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