EGY48酵母感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

EGY48菌株是LexA系统酵母双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒验证蛋白互作或筛库；Transformation marker为： his3，trp1,ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS (上游激 活序列)来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。EGY48-LexA系统有三种配套质粒：pLexA、pB42AD、 p8op-LacZ。质粒pLexA筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD与目 标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pB42AD筛选标志为TRP1，用于表达AD与目标蛋白(Prey)的融合蛋白；报告质粒p8op-LacZ筛选 标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。EGY48感受态细胞经特殊工艺制作，pGBKT7质粒检测转化效率 >104 cfu/μg DNA

基因型：MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-L

2.使用说明：

1).取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3μg, .Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重复一次)，100μl冰.上融化的EGY48感受态细胞，PEG/LiAc 500ul， 轻轻翻转混匀6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亚砜; (用于提高转化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6- 8次;

5).12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃复苏1h; (用于提高转化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬时离心弃上清，用100ul 0.9% NaCl 重悬，涂板,30℃培养48 - 96h。

3.注意事项：

1).感受态细胞 在冰上融化.

2).PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

*本试剂仅供实验室研究使用