产地 | 中国 |
品牌 | Frdbio |
货号 | PPR0026k |
用途 | 科研使用 |
包装规格 | 1ml*2 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 | 否 |
产品介绍:
Frdbio® His标签蛋白纯化试剂盒用于纯化各种表达系统中含有His标签的重组蛋白,包括大肠杆菌表达系统、哺乳动物表达系统、酵母表达系统等等;本试剂盒配备了纯化蛋白所必需预装柱及核心试剂。
本试剂盒中预装柱的填料为Ni Beads 4FF。主要优势如下:
本蛋白纯化试剂特点:
? Ni Beads 4FF纯化可以耐受变性剂,在高浓度尿素和盐酸胍里仍然可以挂柱,纯化包涵体不是障碍;
? 洗脱条件温和,不会对蛋白造成造成损伤;
? 填料再生简单,反复使用,实验室测试表明再生15次后,Ni Beads 4FF填料效率没有明显降低。
产品主要参数:
基质:交联度4%琼脂糖凝胶
载量:>40mg His标签蛋白
介质微球粒径:45-165um
流速:300cm/h
试剂盒已经提供材料:
产品编号 |
预装柱 |
浓缩基础缓冲液(10X) |
浓缩洗脱缓冲液(10X) |
储存缓冲液 |
PPR0026k-1mL |
1mL*2 |
30ml |
15ml |
15ml |
PPR0026k-5mL |
5mL |
30ml*2 |
30ml |
30ml |
其他需要自备试剂材料:
2 待纯化蛋白样品;
2 移液器及吸头;
2 去离子水;
2 0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
产品储存
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
储存温度:2-8℃
产品使用操作:
1.使用前准备
1)缓冲液的准备
基础缓冲液:
按照实验所用量,取试剂盒中浓缩基础缓冲液,加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液;
洗脱液:
按照实验所需用量,取试剂盒中浓缩洗脱液,加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱液;
缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
2)样品准备样品
使用上述基础缓冲液制备上样样品(细胞/细菌裂解液),样品在上样前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,防止堵塞柱子。
3)Frdbio® Ni Beads 4FF纯化柱的准备
取出试剂盒中预装柱平衡到室温,打开纯化柱底部开关,用3-5个体积去离子水冲洗柱床,随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子,确保柱床无气泡。
2.从样品中纯化目标蛋白
1)使用蠕动泵上样或者直接上样(重力法);
上样量不要超过柱子的结合能力。
2)上样完毕后,用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白,直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线(一般需要10-15个柱体积);
3)使用洗脱液洗脱目的蛋白,顺次接收并做好标记,直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线(一般需要5-10个柱体积);
4)SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品(包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品,纯化样品根据后续实验进行透析浓缩等。
3.纯化柱清洗、再生与保存。
1)5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗;
2)3倍柱床体积的去离子水清洗;
3)5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液;
4)3倍柱床体积去离子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。
仅供科研实验使用