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| 产地 | 中国 |
| 品牌 | Frdbio |
| 货号 | Frd00030 |
| 用途范围 | 科研使用 |
| 纯度 | % |
T7 RNA Polymerase (50 U/μL) 产品说明书
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产品名称 |
规格 |
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) |
100 μL |
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Transcription Buffer (10 ×) |
1 mL |
产品概述
T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是一种对T7噬菌体启动子具有高度特异性的DNA依赖性RNA聚合酶。该酶以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与T7启动子下游的DNA一条链互补的RNA。
产品基本信息
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产品名称 |
T7 RNA Polymerase |
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来源 |
E.coli |
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活性 |
50 U/μL |
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储存缓冲液 |
50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.9), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA; 2mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol |
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储存条件 |
-20℃ |
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反应缓冲液（1X） |
40 mM Tris-HCl, 27 mM MgCl2, 10 mM DTT, 2 mM spermidine |
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酶活定义 |
在37℃ pH8.0的条件下，1小时内使1 nmol的[3H]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 |
产品应用
用于单链RNA合成，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA前体。以及合成RNA探针，还可以利用帽类似物合成加帽RNA。
实验流程
1、将各组分解冻分别混匀后，短暂离心使液体收集于管底，置于冰上。
2、体外转录体系
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组分 |
用量 |
终浓度 |
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Transcription Buffer (10 ×) |
2 μL |
1 × |
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) |
2 μL |
5 U/μL |
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ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM) |
Each1.5 μL |
Each 7.5 mM |
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Template DNA |
0.1-1 μg |
- |
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RNase Free Water |
up to 20 μL |
- |
3、混匀、离心、37℃反应2-3 h。
4、（选做）向反应体系中加入Dnase I，37℃孵育15 min，消化DNA模板。
注意事项
1、模板DNA的纯度对体外转录过程影响很大。模板制备过程中的RNase残留会影响体外转录产生的RNA质量。模板DNA应为RNase-Free、高纯度，建议OD260/280为1.8~2.0。
2、添加体系时，模板 加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
3、反应体系中可添加RNase Inhibitor，防止RNase污染。建议20 μL体系中添加4 U RNase Inhibitor。
4、反应体系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic，提高RNA产量。建议20 μL体系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。
仅供科研实验使用
