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Vaccinia Capping Enzyme
  • 品牌:Frdbio
  • 产地:中国
  • 货号:Frd00031
  • 发布日期: 2023-12-28
  • 更新日期: 2024-02-26
产品详请
产地 中国
品牌 Frdbio
货号 Frd00031
用途范围 科研使用
纯度 %
是否进口

Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL) 产品说明书

 

产品名称

产品货号

规格

Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)

Frd00031

100/1000 μL

 

产品概述

牛痘病毒加帽酶是由D1D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性。该酶作用于体外转录产物,在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA5'末端,形成帽子结构(m7Gppp5'N),该结构对于mRNA的稳定、转运和翻译过程具有重要作用。加帽反应在一小时之内完成,效率接近 ,并且保证正确的方向。

 

保存及运输条件

-30~-15℃保存,干冰运输。

 

产品基本信息

产品名称

Vaccinia Capping Enzyme

来源

E.coli

储存缓冲液

20mM Tris-HCl pH8.0; 100mM NaCl; 1mM DTT; 0.1mM EDTA; 0.1%TritonX-100;   50% (v/v) Glycerol

加帽缓冲液1X

50 mM Tris-HCl, pH 8.0; 5 mM KCl; 1 mM MgCl2; 1 mM DTT

酶活定义

37℃条件下,1小时内将10 pmol GTPα-32P)掺入到一条80个核苷酸(80 nt) 转录产物上所需要的酶量,即为1个单位。

 

产品应用

1体内/体外翻译前mRNA的加帽反应。

2mRNA5'末端标记反应。

 

使用方法

加帽反应

1、10 μg RNA1.5 m离心管中,用RNase Free Water稀释至所需体积。

2、将稀释的RNA65加热5 min使RNA变性。

3、冰上放置5 min

4、按顺序加入以下各组分

组分

用量

Denatured RNA

10 μg

10 × Capping Buffer

2 μL

GTP (10 mM)

1 μL

SAM (2 mM)

1 μL

Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μl)

1 μL

RNase Free Water

Up to 20 μL

537℃反应30 min,加帽反应完成,可进行后续实验。

 

注意事项

1用于加帽反应的RNA必须经过纯化并溶解于RNase Free Water

2反应前热处理RNA是为了打开5'末端的高级结构,热处理时间可根据高级结构的复杂程度调整。

3建议在反应体系中加入1-2 μLRNA酶抑制剂(货号:SCB0B006,以提高反应过程中RNA的稳定性。

4SAM室温下不稳定,降解会导致加帽效率变低,因此,建议将SAM放在冰上。

5如果加帽效率低,可以延长反应时间至1 h

 

 

仅供科研实验使用