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GV3101(pSoup-19)感受态细胞
  • 品牌:Frdbio
  • 产地:中国
  • 型号:100ul*10
  • 货号:MCC0109
  • 发布日期: 2023-08-11
  • 更新日期: 2024-02-26
产品详请
产地 中国
品牌 Frdbio
货号 MCC0109
用途范围 科研使用
规格 100ul*10
是否进口

GV3101(pSoup-19)感受态细胞

产品编号

产品名称

规格

MCC0109

GV3101(pSoup-19)感受态细胞

100μl*10

保存条件:-80

1.产品简介:

基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR)Nopaline(pSoup-p19-tetR)

p19蛋白来源于番茄丛矮病毒,可抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应,提高异源基因转录本的稳定性,进而促进异源蛋白的表达,广泛应用于转基因植物及烟草叶片,拟南芥叶片,番茄叶片或原生质体的瞬时表达系统中。GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是TDNA插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)pMP90 (pTiC58DT-DNA)Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性;在GV3101菌株中转入help质粒:pSoup-p19即为GV3101(pSoup-p19)菌株,可帮助pGreen62SKpGs2等质粒在农杆菌中复制,同时赋予该菌株四环素(tet)抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。AngYuBio GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA

2.使用说明:

1). -80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2). 100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高, 次使用前 做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3). 加入700 μl无抗生素的LBYEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4). 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素(不含四环素抗性)的LBYEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天。(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan20 μg/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。

3.注意事项:

1). 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2). 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量,本公司生产的GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞具有四环素抗性,但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆时,只需加入目标质粒抗性的抗生素,不加四环素。

3). 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。

4). 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。

5). 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失,但链霉素不利于农杆菌的转基因操作,培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢失的概率极低

*本试剂仅供实验室研究使用