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产品分类
碱性磷酸酶-抗体快速标记试剂盒
碱性磷酸酶-抗体快速标记试剂盒
物品单位 品牌
Frdbio
  • 产地:中国
  • 货号:ARL0600k-1
  • 发布日期: 2021-03-19
  • 更新日期: 2021-03-19
产品详细说明
产地 中国
品牌 Frdbio
货号 ARL0600k-1
用途范围 科研使用
纯度 %
CAS编号
规格
是否进口

产品介绍:

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下简称AP)分子量140,000Da,在分子生物学和蛋白质研究中的主要应用是从DNA中去除5'-磷酸基团或作为免疫分析(如ELISA)的报告系统。在免疫分析测试中,酶通常与特定的一级或二级抗体结合,其活性用显色(或发光)底物检测。

本试剂盒可以帮助实验者快速实现AP与抗体的偶联。

基本原理:

本试剂盒利用抗体和AP上游离的伯氨基(-NH2),采用定向对接偶联技术将抗体分子与AP共价偶联,主要特点:

ü  试剂盒组分齐全,操作简单,只要按照操作步骤进行便可得到高品质AP偶联抗体;

ü  本试剂盒所配置的AP为高纯度,高活性,效率更高;

ü  本试剂采用定向偶联技术,AP和抗体都不会发生自连,保证偶联物的特异性和均一性;

ü  试剂盒所使用的交联剂增加了延长臂,确保不会因为蛋白质位阻而影响AP酶效率;

试剂盒已经提供材料:

试剂盒规格

20X3T

200X1T

200X3T

2000X1T

可标抗体量

30∽60ug

100∽200ug

300∽600ug

1∽2mg

最多可标抗体数

3

1

3

1

组分名称

各组分配置数量

活化AP冻干粉

20ugX3

200ug

200ugX3

2mg

标记缓冲液

30ml

30ml

30ml

30ml

抗体修饰试剂

30ul*1

30ul*1

30ul*1

30ul*1

30KMWCO超滤管

3

1

3

1

封闭试剂

50ug*3

50ug*1

50ug*3

50ug*1

DMSO溶剂

200ul

200ul

200ul

200ul

说明书

1

 

其他需要自备试剂材料:

2  待标记的生物分子;

2  移液器及吸头;

2  去离子水。

试剂盒储存

试剂盒抗体修饰试剂放在-20?C,其余组分放在2-8℃可保存6个月以上。


试剂盒操作流程:

1.抗体的修饰

1)取待标记抗体(纯度>90%),浓度调整到 5mg/ml左右为宜,按照每毫克抗体加入2μl 抗体修饰试剂溶液,轻轻混匀,在室温下避光搅拌反应 90分钟;

2)反应完毕后,将其转入30KMWCO超滤管,用标记缓冲液超滤3-5次(每次12000rpm 5min),每次管芯内液体体积不超过原体积1/4为宜,*一次超滤完成,管芯内液体即为修饰的抗体。

 

2.活化AP与抗体偶联

1)用标记缓冲液复溶活化AP冻干粉,得到活化AP溶液,浓度调整为5mg/ml(按1mg活化AP冻干粉加入200ul标记缓冲液复溶);

2)将修饰抗体与活化AP溶液 ,按照质量比1:2.5比例(每mg修饰抗体对应2.5mg活化AP溶液)混合,室温避光反应2小时;

3)将封闭试剂管中加入5ulDMSO,配置成10mg/ml封闭试剂溶液;按照每0.5mg抗体5ul的体积比例加入上述步骤2)反应产物中,封闭未反应完的活性基团;

4)标记好的抗体分装,加入适当保护剂,-20℃保存备用。


注意事项:

1) 本试剂盒中抗体修饰试剂和封闭试剂为高活性试剂,请-20 ℃保存;其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2)试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒,会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3) 本试剂盒中活化AP冻干粉需要避光低温保存,一旦复溶请一次性使用完;标记过程尽量保证其避光;

4)封闭剂需现用现配,干粉溶解后不能长期保存;

5)使用本试剂盒标记抗体,其抗体特异性要高,纯度不低于90%,*使用单克隆抗体,溶液环境不含游离氨基,*为PBS溶液;标记前抗体需去除NaN3和BSA,抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失,因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量;

6)由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化,因此修饰后抗体需尽快与活化的AP进行偶联;

7)本试剂盒中的超滤管为特殊处理的,可有效避免酶失活和蛋白吸附损失,市面超滤管可能会对标记效率造成影响。

8)本试剂盒中部分试剂为高活性试剂,对皮肤和身体有一定的危害,请全程戴手套操作;DMSO属微毒类,对人体皮肤有渗透性,对眼有刺激作用,使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。