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| 产地 | 中国 |
| 品牌 | Frdbio |
| 货号 | ARL0021T1 |
| 纯度 | % |
| 规格 | T |
| 是否进口 | 否 |
产品介绍：
2- （4-羟基苯偶氮）苯甲酸(2-(4-Hydroxyphenylazo)benzoic acid ,英文缩写HABA)可以与亲和素特异性结合，其结合复合物为一种黄色或者橘黄色，在500nm有*吸光值；但是其结合力远远低于生物素与亲和素的结合，当溶液中存在生物素的时候，生物素会强竞争让HABA解离下来,引起吸光值下降。基于此原理，可以根据500nm吸光值的变化计算出蛋白标记生物素的量（被标记蛋白与生物素的摩尔比）。
生物素标记摩尔比的计算是基于比尔-朗伯定律（Beer–Lambert law），又称比尔定律或比耳定律（Beer's law），是分光光度法的基本定律，即当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度（Absorbance，A）与吸光物质的浓度（Consenreation，C）及吸收层厚度（length，L）成正比, 用公式表示为：A = ε*C* L其中A为光度，ε为摩尔吸光系数,所以此处公式为A 500= ε500 C L（此处ε500=34,000M-1cm-1）
主要组分：
| 组分名称（Components） | 数量 | 组分说明 |
| HABA溶液 | 1mL | 10mM in 0.01M NaOH |
| 超纯亲和素（Avidin） | 10mg |
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| PBS(pH7.2) | 30mL | 100mM 磷酸钠，150mM NaCl |
储存条件：
该试剂盒在低温下运输，收到后请置于2-8℃保存，保存时间2年以上。
实验前准备：
HABA- Avidin混合液配制：5mg Avidin和300uL 10mM HABA加入到9.7ml PBS溶液中，（合格标准：1cm比色皿A500=0.9 ~ 1.3）配置好的混合液可以在4℃保存，2周内可以正常使用，如果发现有沉淀或者絮状物，请过滤或者离心后使用。
实验操作可以选择分光光度法或微孔酶标板法：
分光光度法：
A． 取900uL HABA- Avidin混合液放入1cm光程比色杯，在500nm波长测量吸光值，记录为A500(H-A);*测量三次取平均值；
B． 在比色杯中加入100uL待测的生物素标记蛋白（Biotinylated Protein,简称BP），充分混匀后，在500nm波长测量吸光值，吸光值稳定20秒以上，记录为A500(H-A-BP);*测量三次取平均值；如果A500(H-A-BP)<0.35,请稀释待测样品，再次重复此步骤。
微孔酶标板法：
A. 取180uL HABA- Avidin混合液放入微孔板中，在500nm波长测量吸光值，记录为A500(H-A);*测量三次取平均值；
B. 在微孔板中加入20uL待测的生物素标记蛋白（Biotinylated Protein,简称BP），震荡或移液器吹打充分混匀后，在500nm波长测量吸光值，吸光值稳定20秒以上，记录为A500(H-A-BP);*测量三次取平均值；如果A500(H-A-BP)< 0.3*A500(H-A),请稀释待测样品，再次重复此步骤。
标记效率计算方法：
1）蛋白摩尔浓度计算：
2a）吸光值变化(分光光度比色皿)：ΔA500=（0.9* A500(H-A)）- A500(H-A-BP)
2b)吸光值变化(微孔酶标板)：ΔA500=A500(H-A)- A500(H-A-BP)
3a)生物素摩尔浓度计算(分光光度计法)：
3b)生物素摩尔浓度计算（微孔板法）：
备注：使用标准96孔微孔板，200ul液体，其液面高度（光程）为0.58cm
标记摩尔比计算：
生物素：蛋白=[(生物素摩尔浓度*10)/蛋白原始摩尔浓度]*稀释倍数
*本试剂仅供实验室研究使用*
