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产品分类
Protein L Beads 4FF
Protein L Beads 4FF
物品单位 品牌
Frdbio
  • 产地:中国
  • 货号:IGP0014
  • 发布日期: 2020-08-28
  • 更新日期: 2020-08-28
产品详细说明
产地 中国
品牌 Frdbio
货号 IGP0014
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 ml
是否进口

一. 产品介绍

rProtein L Beads 4FF 是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质,具体性能见 表 1。Protein L 经过基因重组,由大肠杆菌表达,保留了与抗体 K 链结合的特性,同时不 会影响抗体的抗原结合位点。Protein L 与 protein A 和 Protein G 相比,更能广泛地结合 各种来源及亚类的抗体,包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡,但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。

表1. Protein A Agorase Beads 产品性能

 

项目

性能

基质

高度交联的 4%琼脂糖微球

粒径

45-165

配体

重组蛋白L

载量

> 15 mg 人lgG/ml 介质

工作pH

3-10

*压力

0.3MPa,3bar

保存

20% 乙醇, 2℃ - 8℃

 

二. 纯化流程

1.Buffer 的准备

所用水和Buffer 在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤。

结合缓冲液/洗涤缓冲液:0.15 M 氯化钠、20 mM 磷酸氢二钠,pH7.0

洗脱液:0.1 M 甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl 缓冲液,pH 8.5 。

2.样品准备

上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3. rProtein L Beads 4FF 装填

层析柱的装填(使用储液器装填)

1). 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm 的去离子水。

2). 将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3). 如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。

4). 打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的*流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意:在随后的色谱程序中,不要超过*装柱流速的75%)当柱床高度稳定后,在*的装柱流速下至少再上3 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5). 关闭泵,关闭层析柱出口。

6). 如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。

7). 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。

8). 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

4.样品纯化

1) 将 rProtein L Beads 4FF 装入合适的层析柱,层析用 5 倍柱体积的结合液进行平衡, 使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

2) 将样品加到平衡好的 rProtein L Beads 4FF 中(保证目的蛋白与 rProtein L Beads 4FF 充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。

3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱 液,收集洗脱液,即目的蛋白组分。

5) 依次使用 3 倍柱体积的结合液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料,*再用 5 倍柱体积 的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的 20%的乙醇中,置于 4 度保存,防止填料被细菌污染。

5.SDS-PAGE 检测

将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。

三. 填料清洗

rProtein L Beads 4FF 可以重复使用而无需再生,但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,严重影响柱子的性能,这时需要对树脂进行清洗。

1.去除一些沉淀或变性物质

用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

2.去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton™ X-100 清洗,然后然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。

四. 问题及解决方案

问题

原因分析

推荐解决方案

柱子反压过高

筛板被堵塞

清洗或更换筛板

填料被堵塞

按照第4部分进行树脂CIP清洗

裂解液中含有微小的固体颗粒,建立上柱前过滤

样品纯化过程中曲线不稳

样品或buffer中有气泡

取出样品或柱子中的气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

使用其抗原做配体的介质

抗体被降解

适当的提高洗脱Ph

回收率逐渐减低

上样量太多

减少上样量

柱子太脏

按照第4部分进行树脂CIP清洗