产品介绍

藻红蛋白（R-phycoerythrin ,R-PE）是从红藻中分离提纯的一种荧光蛋白，*激发波长为565nm，*荧光发射峰为575nm。，由于其吸光度和荧光量产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高备受免疫检测标记领域青睐。R-PE蛋白的亚基组成为（αβ）6γ，每个α、β亚基分子量为20KDa，每个γ亚基分子量为30KDa,总分子量为240kDa。目前还没有办法通过重组蛋白表达量产，只能从红藻中提取，因此其生产成本制约其广泛使用。

基本原理

本试剂盒中的荧光素为活化藻红蛋白（R-phycoerythrin ,R-PE），可以直接快捷修饰标记抗体，节约您的时间，避免反复摸索步骤。本试剂盒采用加长臂方案，使被标记抗体与荧光蛋白之间有一定长度柔性连接臂，避免由于位阻妨碍抗体活性或者荧光蛋白发光效率。

主要信息

产品规格：

500ug(本试剂盒可标记300-500ug抗体)

试剂盒已经提供的材料：

注意：试剂盒中所配超滤管标示的截留分子量必须小于待标记分子分子量2倍以上

其他需要自备材料：

? 待标记的生物分子

? 移液器及吸头.

? 去离子水.

? PBS (pH 7.4)

试剂盒储存

2-8℃可避光保存6个月。

试剂盒使用操作流程

1、抗体准备及基本要求：

1.1、被标记抗体要求特异性好，亲和力高，纯度高，*是特异性亲和纯化。

1.2、建议抗体浓度为5-10mg/ml之间。

1.3、抗体中不要含BSA、NaN3或其它蛋白质成份。

1.4、抗体保存缓冲液为PBS，PH7.2-7.4对标记效果*，可将抗体透析至0.1M PBS（含0.15M NaCl），PH7.2-7.4后再进行标记。

2、抗体修饰：

2.1、300-500ug抗体中，加入15ul抗体修饰试剂，混匀后室温反应1.5-2.0小时；

2.2、使用脱盐柱将修饰后的抗体置换至标记缓冲液中，同时去除游离的抗体修饰试剂。

抗体脱盐柱的使用：

1）取出脱盐柱，1000×g离心2min，去除收集液。

2）加入200μl上标记缓冲液，静置10-30S，1000×g离心2min，重复操作2次。

3）脱盐柱中加入150-180ul修饰后的抗体溶液，再加入50ul的标记缓冲液，1000Xg离心2min，收集回收修饰抗体溶液。保存备用。

3、活化R-PE和抗体的偶联

3.1、活化R-PE试剂用100ul标记缓冲液溶解；

3.2、修饰后的抗体溶液逐滴加入到活化R-PE溶液中，边加入边轻轻混匀，室温避光旋转反应偶联3小时，或室温避光旋转偶联2小时后4℃防止过夜；

3.3、取出封闭剂，离心数秒，将干粉甩至管底，管中加入50ulDMSO，用移液器反复吹打或用涡旋器混匀至干粉完全溶解；

3.4、偶联物中加入2.0ul封闭剂，用移液器反复吹打或用涡旋器混匀，室温避光孵育30min。

3.5、将偶联物移至的EP管中，4℃避光保存待用。

 4、标记产物的保存

根据实验需要调整到合适的浓度，可加入适量BSA，甘油及防腐剂等，分装成小份4°C避光，可保存6个月至1年。

注意事项

1.试剂盒中抗体修饰试剂保存于-20℃，其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2.试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3.活化R-PE和封闭剂需现用现配，干粉溶解后不能长期保存。

4.DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。

5.标记前抗体需去除NaN3和BSA，抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失，因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量。

6.由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，因此修饰后抗体需尽快与活化的R-PE进行偶联。