Hi,欢迎来到福因德科技(武汉)有限公司!
客服热线:02787877773
产品分类
Frdbio®藻红蛋白抗体标记试剂盒
Frdbio®藻红蛋白抗体标记试剂盒
物品单位 品牌
Frdbio
  • 产地:中国
  • 货号:ARL0022K-2
  • 发布日期: 2020-06-23
  • 更新日期: 2020-06-23
产品详细说明
产地 中国
品牌 Frdbio
货号 ARL0022K-2
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格
是否进口

产品介绍

藻红蛋白(R-phycoerythrin ,R-PE)是从红藻中分离提纯的一种荧光蛋白,*激发波长为565nm,*荧光发射峰为575nm。,由于其吸光度和荧光量产率很高,荧光强而稳定,灵敏度高备受免疫检测标记领域青睐。R-PE蛋白的亚基组成为(αβ)6γ,每个α、β亚基分子量为20KDa,每个γ亚基分子量为30KDa,总分子量为240kDa。目前还没有办法通过重组蛋白表达量产,只能从红藻中提取,因此其生产成本制约其广泛使用。

基本原理

本试剂盒中的荧光素为活化藻红蛋白(R-phycoerythrin ,R-PE),可以直接快捷修饰标记抗体,节约您的时间,避免反复摸索步骤。本试剂盒采用加长臂方案,使被标记抗体与荧光蛋白之间有一定长度柔性连接臂,避免由于位阻妨碍抗体活性或者荧光蛋白发光效率。

主要信息

产品规格:

500ug(本试剂盒可标记300-500ug抗体)

试剂盒已经提供的材料:

组 份

规 格

数 量

活化R-PE

/

1支

抗体修饰剂

/

1支

封闭剂

/

1支

DMSO

100ul

1支

标记缓冲液

1500ul

1支

超滤管

0.7ml

1支

注意:试剂盒中所配超滤管标示的截留分子量必须小于待标记分子分子量2倍以上

其他需要自备材料:

? 待标记的生物分子

? 移液器及吸头.

? 去离子水.

? PBS (pH 7.4)

试剂盒储存

2-8℃可避光保存6个月


试剂盒使用操作流程
1、抗体准备及基本要求:

1.1、被标记抗体要求特异性好,亲和力高,纯度高,*是特异性亲和纯化。

1.2、建议抗体浓度为5-10mg/ml之间。

1.3、抗体中不要含BSA、NaN3或其它蛋白质成份。

1.4、抗体保存缓冲液为PBS,PH7.2-7.4对标记效果*,可将抗体透析至0.1M PBS(含0.15M NaCl),PH7.2-7.4后再进行标记。

2、抗体修饰:

2.1、300-500ug抗体中,加入15ul抗体修饰试剂,混匀后室温反应1.5-2.0小时;

2.2、使用脱盐柱将修饰后的抗体置换至标记缓冲液中,同时去除游离的抗体修饰试剂。

抗体脱盐柱的使用:

1)取出脱盐柱,1000×g离心2min,去除收集液。

2)加入200μl上标记缓冲液,静置10-30S,1000×g离心2min,重复操作2次。

3)脱盐柱中加入150-180ul修饰后的抗体溶液,再加入50ul的标记缓冲液,1000Xg离心2min,收集回收修饰抗体溶液。保存备用。

3、活化R-PE和抗体的偶联

3.1、活化R-PE试剂用100ul标记缓冲液溶解;

3.2、修饰后的抗体溶液逐滴加入到活化R-PE溶液中,边加入边轻轻混匀,室温避光旋转反应偶联3小时,或室温避光旋转偶联2小时后4℃防止过夜;

3.3、取出封闭剂,离心数秒,将干粉甩至管底,管中加入50ulDMSO,用移液器反复吹打或用涡旋器混匀至干粉完全溶解;

3.4、偶联物中加入2.0ul封闭剂,用移液器反复吹打或用涡旋器混匀,室温避光孵育30min。

3.5、将偶联物移至的EP管中,4℃避光保存待用。

 4、标记产物的保存

根据实验需要调整到合适的浓度,可加入适量BSA,甘油及防腐剂等,分装成小份4°C避光,可保存6个月至1

注意事项

1.试剂盒中抗体修饰试剂保存于-20℃,其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2.试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒,会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3.活化R-PE和封闭剂需现用现配,干粉溶解后不能长期保存。

4.DMSO属微毒类,对人体皮肤有渗透性,对眼有刺激作用,使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。

5.标记前抗体需去除NaN3和BSA,抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失,因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量。

6.由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化,因此修饰后抗体需尽快与活化的R-PE进行偶联。