产地 | 中国 |
品牌 | Frdbio |
货号 | MCC0050 |
用途 | |
包装规格 | 100μl*10 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 |
E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
MCC0050 | E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞 | 100μl*20 |
保存条件:-80℃。
1.产品简介:
本产品是采用大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。补充6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA),提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。
基因型:F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ileX,glyT,leuW,proL)(CamR)
特点:1. 含有pRARE质粒,补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。2. 菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。具氯霉素抗性。pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg DNA。
2.使用说明:
1.取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。
3.42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。
4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。
3.注意事项:
1. 刚化冻的细胞转化效率*,避免反复化冻。
2. 整个动作要轻柔。
3. 质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。
*本试剂仅供实验室研究使用