HB101感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌HB101菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可有效抑制长片段末端重复区的重组，可用来制作 DNA 文库或重组质粒的亚*。

基因型：F- mcrB mrrhsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-

特点：1. HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的杂合产物（同时也是Stbl3的原始菌株）。2. recA13 突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率。3. 不含核酸酶 endA1 突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。4. hsdS20 背景使 HB101 缺失内切酶系统，增强了外源 DNA 的稳定性和提取质量。具链霉素抗性，不可用于蓝、白斑筛选。pUC19 质粒检测，转化效率可达108 cfu/μlDNA。

2. 使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养， 37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．感受态细胞处于冰水混合状态时立即插入冰上。

2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

*本试剂仅供实验室研究使用