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E.coli Rosetta(DE3) 感受态
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  • 发布日期: 2020-05-30
  • 更新日期: 2020-07-27
产品详细说明
用途范围: 纯度: %
CAS编号: 产地: 中国
品牌: Frdbio 规格: 100μl*10
货号: MCC0050 是否进口:

E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞


产品编号

产品名称

规格

MCC0050

E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞

100μl*20

保存条件:-80℃。

1.产品简介:

本产品是采用大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3) 感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。补充6种稀有密码子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA),提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。

基因型:F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ileX,glyT,leuW,proL)(CamR)

特点:1. 含有pRARE质粒,补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。2. 菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。具氯霉素抗性。pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg DNA。

2.使用说明:

1.取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。

3.42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。

4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。

5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。

3.注意事项:

1. 刚化冻的细胞转化效率*,避免反复化冻。

2. 整个动作要轻柔。

3. 质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用



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