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Rossetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞
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  • 发布日期: 2020-05-30
  • 更新日期: 2020-07-27
产品详细说明
品牌: Frdbio CAS编号:
产地: 中国 货号: MCC0090
纯度: % 用途范围:
规格: 100ul*10 是否进口:

Rossetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞

产品编号

产品名称

规格

MCC0090

Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞

100μl*10

保存条件:-80℃。

1.产品简介:

本产品是采用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。同时集合了Origami(DE3)Rosetta(DE3)的优点,有助于含二硫键蛋白的高效表达,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。

基因型:Δ(ara-?leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, StrR, TetR)

特点:1Rosetta-?‐gami系列菌株来源于Origami系列宿主菌,该系列菌株的优点除了含有Origami菌株原有的TrxBGor基因突变提高含二硫键正确折叠,有助于含二硫键蛋白的高效表达,同时含有Rosetta系列菌株中含有的真核细胞稀有密码子。2.含有pRARE质粒,能够提供AUAAGGAGACUACCC,和GGA六个真核细胞中的稀有密码子tRNA,能够有效提升真核细胞蛋白的表达水平。3含有pLySs质粒,能够产生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基础表达水平,的起始复制位点是p15 Origin,这使得该质粒能够和pUC-?‐及pBR322-?‐衍生的质粒互相共存。4 rpsL突变使得该菌株具有链霉素抗性DE3是溶源性的 λDE3,所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。被建议使用于含有Bla标记的氨苄抗性表达质粒,具有具有氯霉素,卡那,链霉素和四环素抗性,当使用pCDF系列载体时,还需要使用壮观霉素(Spectinomycin)进行筛选。pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg DNA

2.使用说明:

1.取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min

342℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。

4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOCLB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养4560min使菌体复苏。

5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOCLB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h

3.注意事项:

1.刚化冻的细胞转化效率*,避免反复化冻。

2.整个动作要轻柔。

3.质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用



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