单抗细胞融合，你不筛选血清就是耍流氓！
单克隆抗体技术飞速发展，什么单B技术啊，噬菌体技术,但是经典的细胞融合杂交瘤技术,可以说永不过时。
客户在询单克隆抗体制备服务的时候，往往会有执念：认为，比如，单B技术，噬菌体展示技术，什么纳米抗体技术这个东西先进，你给他推这个经济适用型的传统的细胞融合单克隆抗体技术，在潜意识里，他可能认为你很low。没关系，你需要什么样的平台，咱就给你上什么样的平台。
新型单抗技术就一定比传统经典的细胞融合单克隆抗体发现技术更好吗？上次有一个做诊断原料的朋友聊天，我们讨论过这个问题。这朋友有点耿直，他说：“我用小鼠细胞融合杂交瘤技术没做出来的几个单抗，委托给一个单B技术的抗体公司，他们还不是没有给我搞出来，还花了我几万块钱。”
新技术的发展和迅速推广肯定有他卓越的优势，但是也不能就说他完全可以cover老的技术。经典的他就是经典。你看不管抗体服务公司说他这个单B技术做得有多厉害，但他为什么还不放弃细胞融合杂交瘤技术平台。
适合的才是最好的。我们不喜新厌旧，在此就不过多的去讨论他们是是非非了。
咱们就说要想做好细胞融合单克隆抗体，细胞培养是基本功，细胞培养里面的血清是最关键的东西。怎么样去把控这个血清呢？大的单抗公司一般会定期去筛选性价比最好的血清，批量囤购。对于小的单抗公司或做单抗不是特别多的中小型实验室一般没有这个精力去筛选，科研院所的实验室，除非管理的特别规范的，一般也没有人会去做规范的血清筛选，因为这个是吃力不讨好的事情，每个人都在赶自己的课题。血清经销商往往在科研实验室推销血清的时候，会送给他们一些血清小样试用，所谓的试用，往往就是养几个细胞，感觉上好一点，就ok了，感觉上不好，就被pass了，一般不会做系统的对比。有很多研究者拿到了血清直接就用，根据以前的或者别人的使用经验，这个血清养其他的比较娇贵的细胞都比较好，理所当然就推论出做单克隆抗体也没问题，其实不然。更有有钱任性的主，我买了“鸡闭口”（Gibco）的大几千块钱的血清，这总应该没问题的呀。我说那还真不一定是最优的，早些年的“鸡闭口”血清的伪品也满天飞，即使是正品，也不一定是性价比最高，动物血液制品它本身就有个体差异和一些不稳定性。
要想做好细胞融合还是要自己去亲自筛选适合的血清。适合于养别的细胞的，不一定适合于做单抗。
那么这个血型筛选该怎么做呢？我讲一下我的方法，仅供参考。
血清筛选方法
首先，我会选择几个比较大的血清品牌，最好能找到血源厂家，或者明确知道他的血源的厂家，之前都没有听过的品牌，就不要去试了；进口品牌也不要去试了，除非你有特别大的量，否则他真没空理你，即使有好的血清，一般价格也比较贵。
其次，从确定的厂家中，去选择比较合适的血清级别，一般我会选择他们的顶级或次顶级的胎牛血清，至于是不是真的胎牛血清，我们也证明不了。做单抗的细胞融合，还是要追求杂交瘤细胞集落生成能力。性能强那么一点，多产生几个克隆，也许你就能筛到非常好的单抗。
再次，向厂家询问确认你选定的血清型号的可成交价格，你这个非常重要；做血清融合测试实验还是很耗时耗力的，你“哼哧哼哧”搞了几个星期，好不容易选定一款效果非常好的血清，结果一问价格，远远超出你的预期和承受能力，那不是白忙活。
最后，让厂家寄送血清小样，每个型号的小样，寄几个不同的批号。批号很重要，批号很重要，批号很重要，原因是血清是从动物身上获取的，个体差异还是很大的。
血清测试（细胞融合杂交瘤培养）
一般细胞融合杂交瘤培养采用20%的血清，做血清筛选测试的时候，可以降低血清的使用浓度，比如，使用15%和10%。这样做的目的是什么呢？读者可以自行思考。
#首轮测试，15%血清浓度
细胞融合操作参照标准流程进行，融合完成的细胞离心后，丢弃上清，细胞沉淀，用含1.18倍双抗（青霉素-链霉素混合）和1.18倍HAT的不完全培养基重悬细胞沉淀，体积为需要铺板细胞悬液总体积的85%，然后平均分成等份，在每个等份里分别加入对应的血清小样，混匀细胞悬液，铺板培养。
比如，需要测试6个血清小样，每个测试小样组预设平行铺3块96孔板，每孔200微升。最终所需的融合细胞悬液总体积为360毫升。首先用306毫升含有1.18倍双抗和1.18倍HAT的不完全培养基重悬细胞沉淀。然后将这些细胞悬液平均等分为6份，每份是51毫升，每份分别加入9毫升对应的血清小样，混匀后立即铺板3块，每孔200微升，立即平铺单层放在5%二氧化碳37度静置培养，7-10天，观察实验结果，计数每板有效细胞集落数。
通过比较细胞集落数和细胞集落生长情况，筛选出优势血清。
每个血清小样所预设平行铺的培养板越多，其结果稳定性，可靠性越好。上文例铺设为3块96孔板，如果条件允许，每组铺5块板，其数据更稳定准确。由于实验工作量比较大，所以操作一定是要标准，尽可能降低人为操作误差，操作尽可能熟练迅速，减少组与组之间的时间误差。
#次轮测试，10%血清浓度
在首轮测试的基础上，进一步降低血清使用浓度，按照以上的方法重复测试。这也算压力测试吧。
#确认测试
经过以上两轮测试筛选，优选得到的血清小样，根据该血清小样货号和批号，去购买他们的大瓶正装，再次重复以上的实验。
别问我为什么，很多厂家给客户提供的小样是非常nice的，这个优质小样也许是他花钱从别的公司购买最好的分装给你的，他自己的正装根本就达不到这个品质。如果你贸然去大批量购买的话，最后你哭都来不及。
当然了，在确认血清批号之前，你还可以对血清的微生物情况进行测试，比如说支原体和所谓的黑胶虫。
最近接收了不少血清公司的小样，在大规模的测，一直在测。但是，目前还没有得到非常满意的血清。基本表现都差不多，做单抗融合确实还是可以用，但我确实没有囤货的欲望。于是我有一个大胆的猜想，我手上拿那么多的小样，是不都来源于相同的血源？
去年曾经筛选到一个特别好的血清批号，这个血清可谓“出道即巅峰”。本次血清测试是以这个血清为标准对照，很遗憾的是没有一个能打过他的。
